КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ

Принцип метода количественного определения витамина С [1] основан на его способности восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол, который в щелочной среде имеет синюю окраску, а в восстановленном состоянии бесцветный.

Количественное определение витамина С проводят, титруя исследуе­мый раствор, подкисленный соляной кислотой, щелочным раствором

2.6- дихлорфенолиндофенола. Пока в титруемом растворе содержится ви­тамин С, приливаемый щелочной раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола бу­дет обесцвечиваться за счет образования восстановленной формы аскорби­новой кислоты. Как только все количество витамина С, имеющееся в ис­следуемом растворе, окислится, 2,6-дихлорфенолиндофенол не будет вос­станавливаться и титруемый раствор приобретет розовую окраску за счет перехода щелочного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола синего цвета в

2.6- дихлорфенолиндофенол красного цвета в кислой среде.

Зная количество 2,6-дихлорфенолиндофенола, израсходованное на тит­рование, и его титр, установленный по аскорбиновой кислоте, вычисляют содержание аскорбиновой кислоты в исследуемом растворе.

Ход работы

Точную навеску исследуемого материала (сухих ягод шиповника - 1 г, хвои - 1 г, капусты - 5 г, картофеля - 5 г) тщательно растирают в фарфоро­вой ступке с 4 мл 2%-ной соляной кислоты, добавив немного измельченно­го стекла. Затем без потерь переносят содержимое ступки в мерную колбу на 25 мл, несколько раз смывая ступку водой и сливая ее по стеклянной палочке в ту же колбу, и доводят объём раствора дистиллированной водой до метки. Полученную смесь оставляют на 5 - 10 мин. Содержимое колбы тщательно перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр и фильтрат используют для определения витамина С. Экстракт, полученный из карто­феля, не фильтруют.

Для титрования отмеривают в коническую колбочку определенный объем фильтрата (шиповника - 1 мл, хвои - 5 мл, капусты - 5 мл, картофеля

- всю полученную смесь без фильтрации), добавляют 4 мл 2%-ного раство­ра соляной кислоты и титруют из бюретки 0,001 и.

Определение титра раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола

В мерной колбе на 50 мл растворяют несколько кристалликов (1-1,5 мт) аскорбиновой кислоты в 2%-ной серной кислоте и доводят этой же кисло­той до метки, тщательно перемешивают. В две конические колбочки берут по 5 мл приготовленного раствора аскорбиновой кислоты и после добавле­ния кристалликов KJ (около 5-10 мт) и 5 капель 1%-ного раствора крах­мала титруют одну колбочку 2,6-дихлорфенолиндофенолом, другую - точ­но 0,001 и. раствором KJO₃ (0,03568 г KJO₃ растворяют в воде и доводят до 1 л). Расчет титра раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола по аскорбиновой кислоте ведут по формуле:

где Т - количество миллиграммов аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 мл раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола; 0,088 - количество мт аскор­биновой кислоты, соответствующее 1 мл 0,001 и. раствора йодата калия; а - количество мл 0,001 и. раствора йодата калия, израсходованного на титрование раствора аскорбиновой кислоты; б - количество мл раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, израсходованное на титрование.

Расчет количества аскорбиновойкислоты в пробе производят по фор­муле:

где X - содержание аскорбиновой кислоты в миллиграмм-процентах;

Т - титр раствора 2 ,6-дихлорфенолиндофенола по аскорбиновой кисло­те, т.е. это количество аскорбиновой кислоты (мт), соответствующее 1 мл раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола;

А - количество раствора 2 ,6-дихлорфенолиндофенола (мл), израсходо­ванное на титрование, за вычетом контроля;

Б - количество мл вытяжки, взятое для титрования; В - обще количест­во вытяжки (мл);

Г - количество вещества в граммах, взятое для анализа; 100 - количест­во граммов исследуемого материала, взятое для вычисления процентного содержания.

Реактивы

1. Соляная кислота, 2%-ный раствор.

2. Аскорбиновая кислота, кристаллическая.

3. Серная кислота, 2%-ный раствор.

4. KJ, кристаллический;

5. Крахмал, 1%-ный раствор.

6. KJO₃, точно 0,001 и. раствор (0,03568 г КЮ₃ растворяют в воде и до­водят до 1 л).

7. 2,6-дихлорфенолиндофенол, 0,001 и. раствор. Для приготовления этого раствора применяют буферную фосфатную смесь (1/15 М) по Серен- сену, так как индикатор в водном растворе довольно быстро разрушается. Для этого берут водяные растворы КН₂РО₄- 9,078 г в 1 л и Na₂HPO₄‘2H₂O - 11,867 г в 1 л. Растворы хранят отдельно. Затем их смешивают в соотно­шении 2:3, тогда pH = 6,9 -7,0. Отвешивают 0,25 г красителя, приливают 700 мл дистиллированной воды, взбалтывают и добавляют 300 мл буфер­ной смеси. На следующий день раствор отфильтровывают и тщательно пе­ремешивают. Определяют титр приготовленного раствора.

Литература

1. Сиянова Н.С., Хисамутдинова В.И., Неуструева С.Н. Методическое руко­водство для практикума по биохимии. Казань: Изд-во Казанского ун-та, 1988. С.90 - 94.