Рецепторы на мембранах

Многие рецепторы представляют собой активные центры ферментов. Однако холинорецептор — это не фермент, а белко­вый комплекс, регулирующий проницаемость клеточной мембра­ны для ионов натрия, калия и кальция [Karlin, 1974].

синапса. Удобнее всего выделять холинорецепторы из холинерг» "ческих синапсов, расположенных на пластинках электрические органов двух видов рыб, Torpedo и Electrophorus. Гомогениза^ цией этой ткани с последующим дифференциальным центрифуг тированием гомогената и седиментацией в градиенте плотности сахарозы удается выделить свободные от АХЭ фрагменты мемб­ран, содержащие холинорецепторы. Эти фрагменты легко обра* зуют синаптосомы, проницаемость которых для ионов ²²Na^ ⁴²К⁺ и ⁴⁵Са²⁺ резко возрастает под действием аналога АХ кар* бахолина (2.11), что свидетельствует о сохранении основных свойств холинорецептора при выделении.

При обработке фрагментов мембран водными растворам» анионных и нейтральных детергентов с последующим ультра­центрифугированием можно выделить в количествах, исчисляе­мых в дециграммах, белковый рецепторный комплекс, свобод­ный от мембранных компонентов [Changeux, 1980]. С этим комплексом агонисты и антагонисты АХ связываются так же, как и с интактными пластинками электрического органа ската.

Высокоочищенный рецепторный комплекс представляет собой гликопротеид с ОММ более 50 ООО. Под электронным микроско­пом холинорецепторы выглядят как скопление розеток. На от­резке длиной 0,1 мкм умещается 12 таких розеток (рис. 2.1). В настоящее время известны полная аминокислотная последо­вательность белковых субъединиц, составляющих рецепторный комплекс, и места присоединения нескольких углеводных остат­ков, находящихся на более липофильной белковой субъединице. Более подробно холинорецептор рассматривается в разд. 12.6.

Все вышеописанное относится к «никотиновому» холиноре- цептору нервно-мышечного синапса. «Мускариновый» рецептор был выделен из мозга быка экстракцией холатом натрия. (Оп­ределения «никотинового» и «мускаринового» типов холиноре­цептора приведены в начале разд. 12.6.) С выделенным из моз­га быка рецептором активно связывается специфический мус­кариновый антагонист [³Н]-атропин (константа ингибирования 2Х І0^-9). Он может быть вытеснен с рецептора немеченым атро­пином или самим АХ и его агонистами [Carson et al., 1977; Car- son, 1982].

Выделены мембранные рецепторы и для других нейромедиа­торов. Все они представляют собой высокофосфорилированные гликопротеиды. Выделение рецепторов катехоламинов описано в разд. 12.4, а в разд. 12.8 обсуждаются рецепторы природных полипептидных анальгетиков, обладающие также сродством к морфину.