ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛУТАТИОНА

Глутатион является трипептидом, состоящим их трех аминокислот: глутаминовой, цистеина и гликоколя.

При кислотном гидролизе глутатион распадается на составляющие его аминокислоты.

Сущность метода

Глутатион в слабощелочной среде с ацетатом ртути дает осадок глута- тионата ртути:

2C₁₀H₁₆O₆N₃SH + Hg(CH₃COO)₂ = Hg(C₁₀H₁₆O₆N₃S)₂ + СН₃СООН. Осадок промывается водой и растворяется в соляной кислоте:

Hg(C10H16O16N3S)2 + 2НС1 = HgC12 + 2C10H16O6N3SH.

Раствор отделяется от не растворимых в воде веществ, и глутатион, пе­

решедший в раствор, титруется 0,001 и. раствором йодата калия в присут­ствии йодистого калия и крахмала:

+ 6HJ + 6КС1 + з Н₂0

Йодистый калий прибавляется в избытке для связывания ионов ртути в растворимое бесцветное комплексное соединение:

Ход анализа

Отвешивают 4 г сырого растительного материла и тщательно растира­ют в ступке с 2 мл 0,3 и. раствора уксуснокислой ртути и 2 мл 30 %-ного раствора уксуснокислого натрия. Гомогенат из ступки переносят в цен­трифужную пробирку, смывая остаток Ю мл дистиллированной воды, пе­ремешивают стеклянной палочкой и оставляют на Ю мин для полноты осаждения. После этого центрифугируют, раствор отбрасывают, а осадок два раза промывают водой порциями по 10 мл при перемешивании.

В осадке вместе с другими веществами находится глутатион, который растворяют в соляной кислоте.

К полученному раствору добавляют 0,5 мл раствора крахмала и титру­ют 0,001 и. раствором KJO₃ до появления неисчезающей синей окраски. Один мл 0,001 и. раствора KJO₃ соответствует 0,307 мт глутатиона. Содер­жание глутатиона вычисляют по формуле:

где X - содержание глутатиона ( в мт на 100 г исследуемого вещества); а - объем 0,001 и. раствора йодата калия, затраченный при титровании

глутатиона (в мл);

К - нормальность раствора йодата калия;

п - навеска исследуемого вещества (в г); 30700 - нормальный титр глу­татиона (в мт), умноженный на 100 для пересчета на 100 г вещества.

Реактивы

1. Раствор уксуснокислой окисной ртути (0,3 и.). Отвешивают 16,25 г HgO и растворяют при нагревании в 100 мл 20%-ного раствора уксусной кислоты. Полученный раствор разбавляют дистиллированной водой до 500 мл.

2. Раствор йодата калия (0,001 и.). Готовится из 0,1 и. раствора раз­бавлением дистиллированной водой. Для этого отбирают пипеткой 5 мл 0,1 и. раствора KJO₃, помещают в мерную колбу на 500 мл, разбавляют во­дой до метки и перемешивают.

3. Раствор йодистого калия (20%-ный). Отвешивают 20 г KJ ч.д.а., растворяют в воде, прибавляют 1 мл 2 и. раствора едкого натра, доводят водой до 100 мл и сохраняют в темной склянке.

4. Раствор крахмала (0,5%-ный). Отвешивают 2,5 г растворимого крах­мала и 10 мг HgJ₂ (для консервирования), растирают в фарфоровой ступке с небольшим количеством воды и вливают в 500 мл кипящей воды, кипятят 1 мин и, если нужно, фильтруют.

5. Раствор уксуснокислого натрия (30%-ный). Отвешивают 30 г уксус­нокислого натрия CH₃COONa-3H₂O ч.д.а., растирают в ступке с 10 мг HgJ₂, растворяют в дистиллированной воде, доводят объем до 100 мл и фильтруют.

6. Раствор соляной кислоты (~ 1 и.). Набирают 84 мл соляной кислоты пл. 1,19, разбавляют дистиллированной водой до 1 л и перемешивают.

Литература

1. Починок Х.Н. Методы биохимического анализа растений. Киев: Наукова думка, 1976. С. 98 - 100.