Исследование воды на цисты патогенных кишечных простейших
Отбор проб воды производят из рек, озер, прудов, арыков, бассейнов, водохранилищ и т.д. Показаниями к этому являются повышенная заболеваемость населения кишечными инфекциями в районе расположения соответствующих водоемов или водоисточников, а также высокий процент возбудителей кишечных протозойных инвазий у обследованных.
Для оценки эффективности работы на очистных сооружениях и выяснения санитарно-протозоологической и эпидемической ситуации по кишечным протозойным инвазиям в районе их расположения анализу подвергают пробы сточной воды до и после их обработки. B сопроводительной документации указывают наименование водоема или водоисточника, место его расположения, погодные условия, время и место отбора пробы.
Количество воды, отбираемой на 1 пробу, может колебаться в зависимости от предполагаемой степени ее загрязнения цистами в следующих пределах: воды из колодцев и водопроводной сети — 50 л, из открытых водоемов — 25 л, сточной воды после завершения процесса ее очистки — 10—15 л, сточной воды на разных стадиях ее очистки на очистных сооружениях — 1—5 л. Из открытых водоемов отбирают пробы воды выше и ниже мест возможного загрязнения ее нечистотами, сточными водами. Пробы морской воды отбирают в прибрежной зоне пляжей, в портах, у причала судов, в местах выпуска стоков. При взятии из колодцев воды общественным ведром его троекратно ополаскивают водой из того же колодца. Водопроводную сеть промывают путем 5—10-минутного пропуска воды через кран. Сточную воду отбирают по 500—600 мл ежечасно в течение 1 сут или по 1 л ежечасно на протяжении светового дня (с 7 до 20 ч) и сливают ее в 1 сосуд.
Взятые для анализа пробы воды из различных водоемов и водоисточников наливают в высокие цилиндры емкостью не менее 10 л, подвергают осветлению путем добавления одного из коагулянтов (алюминия сульфат, железа сульфат и др.) в количестве 0,3 г/л, тщательно перемешивают и отстаивают 2 ч.
Затем удаляют сифоном жидкую часть, а осадок с небольшим количеством надосадочной жидкости повторно смывают водопроводной водой в цилиндр емкостью 1 л, постепенно добавляя к нему 1 % водный раствор соляной кислоты до растворения хлопьев коагулянта. Полученную смесь разбавляют в цилиндре водопроводной водой, доводят ее общий объем до 1 л и отстаивают ее 24 ч. После этого жидкую часть удаляют сифоном, а осадок смешивают с консервантом и исследуют его по той же методике, что и почву.Исследование питьевой воды на цисты патогенных кишечных простейших по Г. И. Новосильцеву и соавт. (1997). Питьевая вода исследуется в объеме 50 л на пробу. Исследуемый объем воды с помощью фильтровального устройства пропускают через мембранные фильтры с размером пор 1—4 мк и диаметром мембранного диска, соответствующим размерам фильтровальной ячейки фильтровального устройства, — обычно 35 мм (фильтры мембранные нитроцеллюлозные № 6 Мытищинской экспериментальной фабрики ультрафильтров; фильтрующие мембраны Владипор марки МФА— MA № 10, МФАС—СПА, Казанского ПО «Тасма», «Милипор», «Прагопор», «Сарториус» или другие с аналогичными свойствами). По мере замедления процесса фильтрования из-за загрязнения фильтра его заменяют новым, а использованные фильтры с осадком помещают в широкогорлые емкости (стаканчики BH) с помощью стерильного пинцета и заливают исследуемой водой в количестве 10— 50 мл для сохранения их во влажном состоянии.
По окончании фильтрации всей пробы осуществляется смыв осадка с фильтров. Каждый фильтр пинцетом опускается в стаканчик с чистой водой; придерживая пинцетом фильтр, осторожно смывают осадок мягкой кисточкой, затем фильтр еще раз прополаскивают в другой порции воды. По окончании отмывки всех фильтров кисточку также тщательно прополаскивают в небольшом объеме чистой воды (5—10 мл). Процедура отмывки фильтров и кисточки требует особой тщательности во избежание возможных потерь цист простейших и яиц гельминтов.
Весь полученный смыв центрифугируют в пробирках емкостью 10 мл в течение 5 мин при 1500 об/мин.
Надосадочную жидкость сливают. При отсутствии необходимости определения жизнеспособных цист и яиц гельминтов осадок ресуспендируют в 6—8 мл 2 % раствора водного формалина. Если предполагается определение жизнеспособности паразитарных патогенов, к осадку добавляют воду. Суспензии вновь центрифугируют в прежнем режиме, после чего удаляют надосадочную жидкость, а к осадку добавляют 3 мл одного из флотантов (предпочтительнее 33 % водный раствор семиводного сульфата цинка). Центрифугируют 5 мин при 2000 об/мин, затем надосадочную жидкость переливают в центрифужную пробирку, разбавляют чистой водой в 4 раза и более. Центрифугируют в прежнем режиме, удаляют надосадочную жидкость, а из осадка готовят препараты на предметных стеклах.B зависимости от задач исследования препарат либо не окрашивают, либо подвергают окраске. Если нужно провести подсчет паразитарных агентов без определения их жизнеспособности или требуется визуальное определение вероятной жизнеспособности цист кишечных простейших и яиц гельминтов, препарат не окрашивают или окрашивают 1 каплей 2 % раствора Люголя. Вероятную жизнеспособность цист лямблий можно определять, окрашивая препарат 1 каплей 1 % раствора водного эозина.
Готовые препараты накрывают покровным стеклом и микроско- пируют с использованием 100—600-кратного увеличения (об. 10, 40, ок. 10, 15), сухой оптической системы или водной иммерсии. Таким образом, микроскопируется весь объем полученного осадка. При необходимости проводят визуальную оценку вероятной жизнеспособности цист лямблий и других простейших, а также яиц гельминтов.
При микроскопировании подсчитывают число паразитарных патогенов во всем объеме осадка, что соответствует их числу во всей исследованной пробе воды, пересчитывают на содержание их в 1 л, одновременно определяют систематическую принадлежность обнаруженных паразитических организмов.
Трудностями осуществления методики на практике являются отбор и доставка в лабораторию значительных объемов воды, длительность ее фильтрования.
Для сокращения трудовых и временных затрат при реализации указанной выше методики нами (Н.А.Романенко и Г.И.Новосиль- цев) предложено:
1. Концентрировать отобранные на местах пробы воды с помощью обработки одним из коагулянтов: сульфатом алюминия, сульфатом железа, сульфатом меди в дозе 0,1—0,3 г/л. После добавления коагулянта пробу воды тщательно размешивают, смесь отстаивают 1—2 ч, после чего надосадочную жидкость удаляют. Осадок переносят в сосуд, соответствующий его объему, и доставляют в лабораторию. Содержимое сосуда вновь отстаивают 1—2 ч, а оса- док после удаления супернатанта переносят в центрифужные пробирки вместимостью 50 мл (в зависимости от объема осадка) и центрифугируют в течение 5 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют слабый раствор хлористоводородной кислоты для растворения хлопьев коагулянта. Смесь размешивают и центрифугируют, надосадочную жидкость удаляют, а осадок обрабатывают по указанной выше методике.
2. Нами совместно с AO «АМИС» (С.М.Кузьмин, И.И.Глуховс- кий, В.М.Левин) предложено проводить концентрирование суспензии цист лямблий, ооцист криптоспоридий и яиц гельминтов в процессе отбора проб воды в специальном пробоотборнике — концентраторе, который является фрагментом инструментально-методического комплекса, разрабатываемого ассоциацией для определения паразитарного загрязнения воды.
Концентрирование суспензии производится на специальном намывном фильтрующем элементе, который формируется из сыпучего материала в процессе пропускания анализируемой воды через установку. Для этого поток воды пропускают через бак с фильтрующим материалом, который выносится в корпус фильтра и оседает на поддерживающей сетке, формируя фильтрующий элемент. При этом исключаются разборка и сборка аппарата для размещения фильтрующего элемента, который формируется автоматически потоком воды.
После пропускания через установку воды разрушение фильтрующего элемента производится путем ее обратного тока из напорного бака.
Извлечение фильтра из корпуса осуществляется одновременно с его разрушением простым сливанием через кран суспензии материала фильтра.Разделение взвешенной смеси материала фильтра и паразитарных объектов производится простым отстаиванием, в результате которого неорганические вещества быстро оседают, а возбудители па- разитозов остаются в жидкости (объем 0,5 л). Надосадочную жидкость декантируют, а полученный концентрат обрабатывают по указанной методике.
3. Совместно с AO «Мембраны» научно-технического центра «Владипор» разработаны (В.П.Дубяга, А.И.Бон) приборы вакуумного фильтрования (ПВФ № 142/Э и ПВФ-142/ЭМ), предназначенные для исследования проб воды питьевого назначения, воды плавательных бассейнов и источников хозяйственно-питьевого водоснабжения при контроле качества по паразитологическим показателям. B приборах используются специальные мембранные фильтры марки МФАС-СПА с размером пор 3—5 мкм. Приборы позволяют профильтровывать 15—20 л за 1 мин. Эффективность задержки цист лямблий на указанных фильтрах достигает 92—96 %.