Исследование почвы на цисты патогенных кишечных простейших

Пробы почвы берут прежде всего с тех участков, где наиболее часто может наблюдаться фекальное загрязнение. Одновременно с отбором проб описывают обследуемую территорию, способы водоснабжения и удаления нечистот, расстояние обследуемых объектов от возможных источников загрязнения, особенности климатических условий в период проведения исследований, а также характер растительного покрова почвы.

Отобранную почву помещают в стеклянные банки с крышкой. B каждой пробе должно содержаться не менее 300—400 г материала. Для того чтобы предупредить возможную гибель цист, к почве добавляют 0,85 % водный раствор натрия хлорида. Анализ проб производят в течение 2 сут после их отбора. До исследования их хранят в бытовом холодильнике при температуре 2—6 °С.

Обнаружение цист в почве по И.К.Падченко и соавт. (1985).

1. Пробу почвы помещают в большую фаянсовую ступку, постепенно добавляют к ней водопроводную воду, тщательно растирают пестиком до гомогенной кашицы и выливают ее в цилиндр емкостью 1—2 л, предварительно наполненный на V4 объема водопроводной водой. Полученную смесь отстаивают в течение 15 мин. Образовавшуюся на поверхности смеси пленку удаляют петлей. После 15-минутного отстаивания жидкую часть смеси отсасывают сифоном в чистый цилиндр, а осадок повторно отмывают (не менее 3 раз) водопроводной водой и смешивают с жидкой частью смеси, полученной после первого 15-минутного отстаивания. Собранная в 1 цилиндр жидкая часть смеси отстаивается в течение 24 ч, после чего надосадочная жидкость удаляется сифоном, а осадок исследуют в нативных мазках и окрашенных раствором Люголя препаратах. C этой целью осадок тщательно встряхивают и 1 каплю полученной взвеси наносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым микроскопом.

Для того чтобы осадок длительное время оставался пригодным к исследованию (свыше 2 мес), к нему добавляют предложенный нами консервант. C этой целью из проб исследуемого материала получают осадок, содержащий обогащенную взвесь цист кишечных простейших. Осадок обрабатывают консервантом, содержащим мертиолат, 40 % раствор формалина, спирт этиловый 96° и физиологический раствор.

K осадку исследуемого материала консервант добавляют в соотношении 1:2 и хранят его в бытовом холодильнике в течение 2 мес и более. Для приготовления мазков каплю исследованной смеси осадка с консервантом после встряхивания наносят пипеткой на предметное стекло, смешивают ее с каплей акридинового оранжевого, разведенного 1:500, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым или люминесцентным микроскопом, подсчитывая при этом число неокрашенных (живых) и окрашенных (мертвых и дегенерирующих) цист кишечных простейших каждого вида. Погибшие цисты под люминесцентным микроскопом красные, а под световым — желтые.

2. Пробы почвы (масса 300—400 г) отбирают на территории изучаемых объектов в стеклянные банки. Для предупреждения возможной гибели цист к отобранным пробам добавляют 0,85 % водный раствор хлорида натрия до полного увлажнения почвы. B лаборатории пробу почвы помещают в большую фаянсовую ступку, постепенно добавляя к ней водопроводную воду, и тщательно растирают пестиком до образования гомогенной кашицы. Полученную смесь выливают в стеклянный цилиндр емкостью 10 л, предварительно наполненный на V4 объема водопроводной водой, и отстаивают в течение 15 мин. Образовавшуюся на поверхности смеси пленку снимают петлей. После 15-минутного отстаивания надосадочную жидкость отсасывают сифоном в чистый цилиндр емкостью 10 л и отстаивают в течение 24 ч, а осадок удаляют. Спустя 24 ч надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок повторно смывают водопроводной водой в цилиндр емкостью 1 л, предварительно наполненный ею на V4 объема. Полученную смесь отстаивают 24 ч, после чего надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок смешивают с консервантом и исследуют так же, как и в первом случае.