Исследование почвы на личинки гельминтов
Исследование почвы на наличие личинок гельминтов проводят методом Бермана. Стеклянную воронку (диаметром 10—15 см), соединенную при помощи резиновой трубки с узкой стеклянной пробиркой, устанавливают в штатив и наполняют водой (температура 45—50 0C).
Почву в количестве 20—40 г на кусочке марли помещают на металлическую сетку (или ситечко для молока), которую устанавливают на воронке так, чтобы нижняя часть (с почвой) соприкасалась с водой.Воронку с почвой ставят в термостат при температуре 37 0C. Личинки гельминтов, обладая термотропностью, мигрируют из почвы через сито в воду и оседают на дно пробирки. Через 3—4 ч осторожно отсоединяют пробирку от воронки, сливают верхний слой жидкости, а осадок переносят на предметное стекло и микроскопи- руют. Ho лучше пробирки центрифугировать, а после этого исследовать осадок. Опыт показывает, что осадок в пробирке нередко загрязняется частицами почвы. Это затрудняет обнаружение личинок нематод. Вместо шелка и марли можно применять ситечко для фильтрования молока. B результате осадок получается чистый, и личинки обнаруживаются быстро. Ho при этом надо иметь в виду, что некоторые личинки могут задерживаться на молочном фильтре.
Метод Гнединой. Почву в количестве 10 г помещают в химический стакан, затем его наполняют водой и тщательно перемешивают содержимое палочкой. Отстаивают 5 мин, после чего верхний слой сливают в другой стакан, а к осадку вновь добавляют порцию воды. Процедуру отмывания продолжаютдо тех пор, пока над осадком в стакане не будет прозрачная вода. Затем промывную воду центрифугируют, а осадок микроскопируют. Промывную воду можно профильтровать через плотную ткань (через перкаль), а затем смыть осадок.
Необходимо дифференцировать личинки паразитических и сво- бодноживущих нематод, обнаруженных в почве. B почве и воде встречаются свободноживущие нематоды и их личинки. Для отличения личинок свободноживущих нематод от паразитических применяют метод Корта.
Принцип его заключается в воздействии на личинки нематод формалином. При этом личинки свободноживущих нематод погибают быстрее, чем паразитические. Личинки помещают в воду в чашки Петри или на часовое стекло. При добавлении 40 % раствора формалина к жидкости с личинками нематод в соотношении 1:5 личинки свободноживущих нематод гибнут через 5—8 мин, а паразитические остаются живыми в течение 15—20 мин, но подвижностьих замедляется; при добавлении формалина в соотношении 1:25 первые гибнут через 12 мин, тогда как вторые в 95 % случаев остаются достаточно подвижными. М.П.Гнедина рекомендует формалин добавлять в соотношении 1:5.Для учета личинок стронгилоидес предложено применять предметные стекла, большие стеклянные пластинки, чашки Петри, часовые стекла и счетную гельминтологическую камеру А.М.Музыков- ского, которые, к сожалению, обладают следующими недостатками. Микроскопирование густого осадка значительно затрудняет обнаружение и количественный учет личинок, а также их морфологическое изучение. Разбавление осадка водой ведет к увеличению объема исследуемого материала и затрат времени на микроскопирование. Движениеразбавленного материала в процессе его исследования затрудняет точный подсчет личинок. При микроскопировании затруднен полный учет полей зрения, что неизбежно ведет к их потере или повторному частичному или полному просмотру. K недостаткам гельминтологической камеры Музыковского относится еще и ограничение объема исследуемого материала (1 мл), что при незначительной интенсивности обсеменения его личинками может дать отрицательный результат.
Учитывая это, Н.А.Романенко и др. (1982) предложили специальную камеру для количественного учета личинок нематод. Камера размером 11 x8x 1,5 см выполнена из плексигласа толщиной 0,2 см и имеет 8 каналов шириной по 0,7 см, т.е. она равна диаметру поля зрения микроскопа МБС-1 при кратности увеличения 2x8. Ha наружной поверхности вдоль дна камеры имеются две полоски из плексигласа толщиной 0,5 мм, шириной 2 мм.
Материал для исследования разливают равномерно по каналам камеры и добавляют чистую воду. Уровень последней должен быть на 1—2 мм выше верхних краев каналов. Объем разбавлецного материала должен стать 50—55 мл, что будет способствовать обнаружению личинок даже при их незначительном содержании. Толщина жидкого слоя 0,6—0,7 см позволяет хорошо его просматривать, считать личинок. При пользовании камерой исключается повторный просмотр одних и тех же полей зрения. Личинки, как правило, быстро оседают на дно камеры, что исключает возможность их перехода из одного канала в другой, а также необходимость просмотра верхних и нижних слоев жидкости параллельно. Для более тщательного изучения морфологии личинок их с помощью глазной пипетки переносят из каналов камеры на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют под большим увеличением микроскопа. Камеру обеззараживают погружением на 15—20 ч в 2 % раствор карболовой кислоты.
Нами проведено сравнение эффективности выявления личинок нематод предложенной камерой и камерой Музыковского. Исследовались ткани печени и легких белых мышей, инвазированных личинками аскариды свиней. При этом учитывалось количество выявленных личинок и время, затрачиваемое на микроскопирование 1 пробы. Каждым способом исследовано по 36 проб (18 проб тканей печени и 18 проб тканей легких).
Результаты исследования показывают, что предлагаемой камерой выявляется на 42,5 % больше личинок аскарид и на микроскопирование 1 пробы затрачивается в среднем в 2,7 раза меньше времени по сравнению с данными исследований, проводимых с помощью камеры Музыковского. Предлагаемая намц камера способствует повышению производительности труда исследователей при проведении массовых обследований населения на стронгилоидоз.