Выделение молекул, содержащих рецепторы.
Если рецептор расположен на макромолекуле, то его выделение в чистом виде так же невозможно, как и выделение активного центра фермента. Как указывается в разд. 2.1, в действительности многие рецепторы — активные центры ферментов.
Поэтому, за исключением случаев, когда рецептор является малой молекулой (разд. 2.3), задача сводится к выделению и очистке макромолекулы, содержащей рецептор. Для этого гомогенизированную ткань инкубируют с меченым агонистом или антагонистом природного лиганда (например, нейромедиатора). Если связь данного лиганда с рецептором прочна, он может служить индикатором при очистке и концентрировании рецепторной молекулы. На последних стадиях очистки этот лиганд можно заменить другим, менее прочно связывающимся с рецептором, или же удалить его диализом или аффинной хроматографией.Для изучения рецепторов используют и молекулярные зонды. Они представляют собой малые молекулы с каким-либо выраженным и измеряемым физическим свойством — флюоресценцией, поглощением в видимой области. Необходимым условием является изменение физических характеристик при адсорбции на рецепторе. Применяют также ядерный магнитный и электронный парамагнитный резонансы, последний с использованием нитроксидных радикалов. Энергия изучения флюоресцентного зонда зависит от полярности места связывания и может передаваться от атомов, входящих в связывающее место, к молекуле зонда и изменять параметры ее флюоресценции. Для холинорецептора флюоресцентным зондом служит перхлорат триметиламмоний этиламида 1-диметиламинонафталин-5-суль- фокислоты. Возможность его использования для идентификации и анализа рецептора подтверждается тем, что он конку- рентно вытесняется АХ, диметилтубокурарином и декаметонием [Weber et al., 1971]. Более подробно об использовании зондов, их преимуществах и недостатках см. Lee (1982). В настоящее время выходит многотомное издание, посвященное рецепторам [O’Brien, 1979]’.
2.5.