Исследование сточных вод
При определении содержания яиц гельминтов в сточных водах количество последних на пробу в зависимости от предлагаемого уровня обсемененности должно быть не менее: неочищенных (до поступления на очистные сооружения) 1 л, после сооружений механической очистки 3—5 л, после вторичных отстойников, биологических прудов, полей фильтрации, земледельческих полей орошения (дренажные воды) 10—15 л.
Пробы сточной воды необходимо брать ежечасно в течение суток («среднесуточная») или дня (с 7 до 20 ч — «среднедневная»), отдельными порциями по 0,5—1 л в большие емкости. После тщательного размешивания сточной воды в последней отбирают для исследования 3—4 пробы указанных объемов.Метод Васильковой. Автор рекомендует фильтровать сточную воду через планктонные фильтры в аппарате Гольдмана с водоструйным или вакуумным насосом (в лаборатории) или ручным насосом Шинца (в полевых условиях). Ha фильтрацию 1 л сточной воды затрачивают до 40—50 фильтров. Фильтры подвергают микроскопическому исследованию после просветления 20—30 %раство- ром соляной кислоты.
Метод Романенко (1982). Берут 1 л сточной воды и помещают в стеклянный цилиндр емкостью 1200—1500 мл, куда добавляют один из коагулянтов: сульфат алюминия, сульфат железа, сульфат меди в дозе 0,5—0,6 г/л и тщательно размешивают. B сточной воде образуются хлопья, которые обволакивают взвешенные в воде частицы, в том числе и яйца гельминтов, и вместе с ними оседают на дно цилиндра. Полное осветление сточной воды наступает через 40— 50 мин. После отсасывания сифоном или пипеткой надосадочной жидкости осадок помещают в центрифуЖные пробирки и центрифугируют в течение 3 мин при 1000 об/мин. Воду сливают, а к осадку добавляют 2—4 мл 1—3 % раствора соляной кислоты для растворения хлопьев коагулянта. Смесьразмешивают и центрифугируют, жидкость сливают, а осадок обрабатывают по методике Романенко и Гуджабидзе, предложенной для исследования почвы.
Внесение коагулянта можно производить или после доставки сточ- ной воды в лабораторию, или во время забора проб воды. B этом случае коагуляция начинается сразу же после заполнения посуды водой.Методика Падченко и др. (1985). Пробы стоков наливают в цилиндры емкостью 10 л и отстаивают 5 мин. Всплывшие на поверхность жидкости плотные примеси удаляют петлей. После 5-минутного отстаивания надосадочную жидкость переливают сифоном в другой цилиндр, а осадок удаляют. Затем к жидкой части добавляют один из коагулянтов (0,3 г/л алюминия сульфата, железа сульфата и др.), тщательно перемешивают, отстаивают 1,5—2 ч. Образовавшуюся надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок с небольшим количеством надосадочной жидкости повторно смывают водопроводной водой в цилиндр емкостью 1 л, постепенно добавляя к нему 1—3 % водный раствор соляной кислоты для растворения хлопьев коагулянта. Полученную смесь разбавляют в малом цилиндре водопроводной водой, доводят ее общий объем до 1 л и отстаивают 24 ч. Затем жидкую часть удаляют сифоном, а осадок исследуют под световым или люминесцентным микроскопом.
Длительное хранение осадка (в течение 2 мес и более в лабораторных условиях) и идентификацию жизнеспособных и нежизнеспособных яиц гельминтов обеспечивают при помощи консерванта, содержащего в 1 л мертиолят — 0,016—0,018; раствор формалина 40 %—41—44; спирт этиловый 96°—104—109, физиологический раствор — 855—847 мм. Консервантдобавляют к осадку в соотношении 2:1. Полученную смесь хранят в бытовом холодильнике при температуре 2—6 0C.
При интенсивном загрязнении материала яйцами гельминтов исследуют не менее 1 мл осадка, а при незначительной его загрязненности микроскопии подвергается весь осадок. Перед исследованием осадок тщательно встряхивают и пастеровской пипеткой наносят 1 каплю полученной взвеси на предметное стекло, добавляют к ней каплю водного раствора акридинового оранжевого в разведении 1:500, 1:200, тщательно перемешивают, накрывают покровным стеклом и, спустя 45—60 мин, микроскопируют под световым или люминесцентным микроскопом.
Число яиц гельминтов в сточной воде определяют по предложенной авторами формуле:
_ AXB
Х " Схд ’
где A — число яиц гельминтов в просмотренном объеме осадка; B — общий объем осадка, мл; Д — общий объем пробы, отобранной для исследования сточной воды; C — объем просмотренного осадка, мл.
Метод, рекомендуемый ВОЗ Щункан Mapa и др., 1992] для количественного определения яиц гельминтов в сточных водах, представляет собой модификацию метода, описанного Teichmann в 1986 г. Он основан на флотации посредством центрифугирования.
Ход определения. ТПробысточныхводобъемомнеменее 1 л следует брать в каждой точке в одно и то же время суток и отправлять в лабораторию.
2. B лаборатории каждую пробу помещают в мензурку объемом 1 л (диаметром 15 см) и дают отстояться в течение 8 ч. Осаждение может происходить ночью, а определение продолжают на следующий день.
3. После осаждения надосадочную жидкость удаляют с помощью водоструйного насоса.
4. Осадок переносят в центрифужные пробирки емкостью 20 мл (в каждую пробирку помещают не более 3 мл осадка). Стенки мензурки, в которой происходило осаждение, тщательно обмывают струей воды и добавляют эту воду к осадку в центрифужных пробирках. После этого пробирки центрифугируют в течение 10 МИН CO скоростью 700 об/мин и надосадочную жидкость отсасывают пипеткой.
5. B каждую пробирку с осадком добавляют 3 мл раствора NaNO3 (500 г/л). Относительная плотность раствора нитрата натрия должна составлять 1,3. (Примечание: при слишком низкой плотности раствора флотация будет недостаточно эффективной и некоторые яйца гельминтов не всплывут на поверхность.)
6. После добавления раствора нитрата натрия пробирки центрифугируют в течение 3 мин при скорости 1000 об/мин.
7. Надосадочную жидкость (в которой теперь находятся яйца паразитов) осторожно удаляют и переносят в мензурку емкостью 1 л (диаметром 15 см), содержащую чуть меньше 1 л чистой воды (вода снижает концентрацию нитрата натрия, и яйца гельминтов оседают на дно мензурки).
8. B каждую пробирку к осадку вновь добавляют 3 мл раствора нитрата натрия и пробирки центрифугируют 3 мин при скорости 1000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно переносят в мензурку, в которой уже находится первая порция надосадочной жидкости.
9. Вновь повторяют процедуру, описанную в пункте 8 (в общей сложности осадок центрифугируют с раствором нитрата натрия
3 раза).
10. Мензурку, в которой находятся все 3 порции надосадочной жидкости, разбавленные водой, оставляют на несколько часов, с тем чтобы все яйца гельминтов осели на дно.
11. Надосадочную жидкость из мензурки осторожно удаляют и осадок переносят в центрифужные пробирки. Стенки мензурки тщательно обмывают струей воды и эту воду добавляют к осадку в центрифужных пробирках. После этого пробирки центрифугируют
4 мин при 1000 об/мин.
12. Полученный осадок помещают на предметные стекла и исследуют под микроскопом. Препарат можно просветлить парафиновым маслом после испарения воды. Подсчет яиц гельминтов проводят при 100-кратном увеличении.
Варианты:
• вместо сбора всех надосадочных жидкостей, образующихся в результате центрифугирования осадка в растворе нитрата натрия, в мензурку с водой для повторного осаждения последние после трех центрифугирований (пункты 6—9) можно профильтровать через мембранный фильтр (диаметр пор около 10 мкм). Фильтры высушивают в нейтральном бальзаме, нанесенном на предметные стекла, или непосредственно исследуют под микроскопом для подсчета яиц. Применение мембранных фильтров проще и эффективнее указанного способа, но является более дорогостоящим методом;
• в пунктах 2 и 7 однолитровую мензурку можно заменить конической колбой. Это усиливает осаждение и увеличивает выход яиц гельминтов. Можно также использовать несколько конических колб меньшей емкости. При отсутствии нитрата натрия используется раствор сульфата магния такой же плотности.
Вывод: при использовании этой методики для обработки сточных вод эффективность выявления яиц гельминтов составляет 70 % в тех случаях, когда количество яиц равно 100/л. По мере увеличения их концентрации увеличивается и возможность выявления. Если концентрация яиц равна 10/л, то эффективность метода составляет около 50 %, а при концентрации 1/л она снижается до 33 %.