Исследование некоторых гидробионтов и земноводных на зараженность личинками гельминтов
B настоящее время трудно найти даже единичные особи рыб ес- тественных популяций, свободные от гельминтов. Большинство их не передаются человеку. Однако существуют отдельные виды, личинки которых представляют опасность.
Для одних гельминтов человек и наземные млекопитающие — окончательные хозяева. Для других такими хозяевами являются ластоногие, китообразные и рыбоядные птицы. При этом личинки, например анизакид, попав с рыбой в организм человека, приживаются, но не завершают развития. Исследуя 50 и более особей какого-либо вида рыб из каждого водоема, можно экстраполировать результаты экспертизы и приближенно судить о зараженности в целом.Человек и млекопитающие заражаются при поедании рыбы, содержащей личинки гельминтов. Проводят экспертизу B основном свежевыловленной, а в отдельных случаях и мороженой рыбы, так как исследование копченой, соленой, вяленой не всегда дает объективные результаты.
Исследование карповых рыб на зараженность метацеркариями возбудителя описторхоза. Метацеркарий описторха — свернутая личинка в овальной или круглой цисте с двухслойной оболочкой. Величина цисты 0,18x0,28—0,23x0,37 мм. Видны ротовая и брюшная присоски, в задней части личинки — крупный темный экскреторный пузырь. Положение присосок в живой (инцистированной) личинке меняется. Подвижность ее усиливается при повышении внешней температуры; движется и экскреторный пузырь. При разрушении цисты препаровальной иглой личинка выходит из нее, расправляется, становится удлиненной, заметны также фаринкс, пищевод, две кишки; личинка покрыта мелкими шипиками до уровня брюшной присоски. Величина такой личинки 0,44—0,55x0,12—0,16 мм.
Метацеркарии описторха живут в рыбе до 2,5 лет. Поэтому целесообразно исследовать рыб старших возрастов. Метацеркарии описторха обнаруживают в поверхностных слоях мышечной ткани, в основном в спинной области, чаще в средней и передней трети, меньше в хвостовой части, иногда их находят в голове, жабрах, толще чешуи.
У молоди (до года) личинок чаще определяют в хвостовой области.Метод компрессорного исследования.Освобождают среднюю часть тела от чешуи в пределах вероятной локализации ме- тацеркариев. Затем скальпелем разрезают кожу по средней линии спины и перпендикулярно делают два разреза до боковой линии впереди и сзади с расчетом исследования мускулатуры в середине тела. Пинцетом поднимают край кожи в верхней части тела и с помощью скальпеля отделяют ее до боковой линии так, чтобы подкожная клетчатка осталась на поверхности мышц. Ножницами Купера нарезают кусочки поверхностного слоя мышц толщиной 2—3 мм и размещают их по всей поверхности нижнего стекла компрессория, накрывают верхним стеклом и слегка сжимают винтами. C помощью МБС просматривают все кусочки, взятые от одной рыбы. Можно пользоваться для компрессии и двумя предметными стеклами (нижнее стекло — большей площади). Допускается исследование и с помощью препаровальной лупы с увеличением в 15—20 раз. Для уточнения диагноза исследуют препарат при большом увеличении. Кусочки ткани с личинками переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопиру- ют под МБИ. При исследовании вяленой, копченой и соленой рыбы предварительно отобранные участки тела вымачивают, однако результаты получаются хуже, чем у свежей рыбы.
M e т о д п e p e в a p и в а н и я м ы ш ц p ы б в и с к у с с т в e н - ном соке для выделения метацеркариев описторха по методу Глазкова идр.Мышечнуютканьрыбысподкож- ной жировой клетчаткой отделяют от костей и тщательно измельчают ножом или в мясорубке. Пробы (10 г) помещают в чашки с плоским дном и заливают в соотношении 1:10 желудочным соком (11 мл концентрированной соляной кислоты,7 г пепсина, 9 г хлорида натрия на 1 л воды). Чашки с пробами помещают на 3 ч в термостат при 36— 37 0C. Затем содержимое фильтруют в стеклянные цилиндры через металлический фильтр с ячейками 1X1 мм. Через 15—20 мин верхний слой с переваренной мышечной тканью сливают, а осевших личинок переносят в чашку Петри или на часовое стекло и подсчитывают под МБС (X16).
Освободившаяся личинка описторха достигает 1 мм длины. Шипиков на теле может не быть (выпадают). Экскреторный пузырь занимает почти всю заднюю часть тела. Ha переднем конце имеется ротовая присоска диаметром 0,071—0,12 мм. Заметны глотка, пищевод, разделяющийся на две кишечные ветви на середине расстояния между присосками. Кишечные стволы идут до заднего конца. Брюшная присоска (0,088—0,139 мм) больше ротовой. От переднего края экскреторного пузыря отходят два тонких выделительных канальца, видимых до уровня глотки.
Пораженноцть каждого вида рыбы учитывают по формуле:
п XlOQ %
N
где P — общая инвазированность, %; п — число зараженных особей; N — число исследованных особей.
При исследовании методом переваривания имеется возможность подсчета инвазии рыбы по формуле:
■ m Icp = ^-,
где Icp — средняя интенсивность одной зараженной рыбы; m — общее количество обнаруженных метацеркариев; N — количество инвазированных особей.
Дифференциальная диагностика метацеркариев описторха. B рыбе поселяются метацеркарии различных трематод, которые завершают развитие в млекопитающих, птицах, питающихся рыбами, и в хищных рыбах. Целесообразно исследовать рыбу свежую или в первые дни после отлова, так как в ней метацеркарии описторха в цисте совершают движения.
Другие метацеркарии в свежевыловленной рыбе при комнатной температуре обычно неподвижны или слабо подвижны, различаются сплошной темной окраской, нередко вытянутые или округлые. B карповых рыбах, помимо описторхов, развиваются сходные метацеркарии других трематод семейства описторхид — меторхисов и псевдамфистомумов.
Metorchis albidus. Циста личинки величиной 0,13X0,19—0,16x x0,23 мм. Между оболочками цисты заметен промежуток. Личинка по сравнению с описторхом менее подвижна. Треугольной формы шипики расположены на передней части тела до уровня заднего края брюшной присоски. Экскреторный пузырь занимает не более V4 объема задней части тела. Эксцистированная личинка длиной 0,4— 0,5 мм, шириной около 0,12 мм.
Ротовая присоска (0,09 мм) крупнее брюшной (0,06 мм), расположенной несколько кзади от середины тела.M.xanthosomus (M.intermedius) отличается толстой упругой прозрачной оболочкой. B компрессории она имеет вид светлого кольца.
Размер цисты с оболочкой диаметром 0,23—0,32 мм, без нее — 0,15— 0,23 мм. Передняя часть тела густо покрыта шипиками, видимыми даже через оболочку. Ротовая и брюшная присоски равны 0,037x x0,07—0,067x0,071 мм. Такой же длины и пищевод. Овальный экскреторный пузырь занимает большую часть тела за брюшной присоской. Размер эксцистированной личинки 0,40—0,86x0,11— 0,14 мм.
Pseudamphistomum truncatum паразитирует у домашних и диких плотоядных, каспийских тюленей и человека. Локализация: желчные протоки печени.
Отличие от метацеркариев описторха: большая величина цисты, свободное расположение в ней личинки, движение ее более замедленное, освобожденный от цисты метацеркарий более крупный, задняя часть его притупленная (обрубленная). Последний признак выявляется при легком надавливании препаровальной иглой на покровное стекло, под которым находится метацеркарий.
Исследование пресноводных рыб на зараженность метацеркария- ми клонорха (Clonorchis sinensis). Клонорхоз распространен на Дальнем Востоке (бассейн Амура и других рек). B развитии клонорха участвуют моллюски из семейства битиниид и рыбы — амурский чебачок, востробрюшка, пескарь, язь, белый и черный амур, толстолобик, верхоглядка, карась, сазан и др.
Рыбу исследуют теми же методами, что и при выявлении личинок описторха. Метацеркарии клонорха шаровидной или коконовидной формы, располагаются в мышцах, размеры цисты 169,0X155,5 мк, она состоит из трех оболочек. B свернутой личинке заметны две присоски и темный экскреторный пузырь. Освобожденная из цисты личинка удлиненной формы (длина 347,5 мк, ширина 141 мк), с округлым передним и заостренным задним концом. Tery- мент, за исключением самой задней части тела, покрыт мелкими шипиками. По бокам тела расположены около 10 папилл. Обе присоски округло-овальные, брюшная несколько крупнее ротовой.
Выражены предглотка, пищевод, две слепые кишки. B бифуркации кишок — 6 пар клеток (гомологи желез проникновения). Экскреторный пузырь грушевидный, располагается в задней четверти тела. Размеры присосок: ротовая — 60,2X55,8, брюшная — 69,9x66,4 мк.Исследование пресноводных рыб на зараженность метацеркария- ми метагонимуса (Metagonimus yokogawai). Метагонимус паразитирует в тонком кишечнике человека, плотоядных и цапли. Распространен в Приморье, бассейнах Амура, Дуная, Днепра, Буга, рек Каспийского моря. B развитии метагонимуса участвуют рыбы — язь, карась, сиг, пескарь, сазан, горчак, востробрюшка, жерех, верхоглядка, лещ, красноперка, толстолобик, таймень, подуст, муксун, чебак, сом и др. Локализация: метацеркарий наиболее часто отмечается на чешуе, реже — на плавниках, жабрах, в подкожной ткани, мышцах.
Метацеркарий имеет вид уплотненной цисты округлой, реже овальной формы. Размер ее от 0,16 до 0,19 мм. B тканях личинки находится большое количество бурого пигмента. Хорошо видны обе присоски. Экскреторный пузырь овальный, заполнен преломляющими свет темно-бурыми гранулами. Цистадвухслойная. Размеры экс- цистированной личинки 0,320—0,360X0,112—0,185 мм, диаметр ротовой присоски — 0,058—0,066, брюшной — 0,045—0,051 мм.
Микроскопируют чешуйки, кусочки жабр, плавников, сдавливая их между предметными стеклами или в компрессории. Для лучшей видимости с нижней стороны чешуек удаляют пленку и просветляют 50 % раствором глицерина. Для уточнения диагноза и жизнеспособности личинок применяют биологическую методику: скармливают кусочки жабр, плавника котенку, через 11 сут начнут выделяться яйца метагонимуса.