Пример вычисления титра 2,6-дихлорфенолиндофенола

На титрование пошло 1,32 см³ краски и 1,68 см³ йодата. Следовательно, 1 см³ раствора краски эквивалентен (0,088*1,68): 1,32=0,112 мт аскорбино­вой кислоты.

Среднюю пробу (плодов, кочанов, корнеплодов, клубней, листовых овощей) предварительно грубо измельчают ножом из нержавеющей или хромированной стали на плексигласовой пластинке или в ростильне (следы железа, и особенно меди, катализируют разрушение аскорбиновой кисло­ты). Весь процесс измельчения необходимо выполнить как можно быстрее. Средняя проба составляется из не менее чем 10-20 экземпляров, поэтому пробу для анализа берут так, чтобы в соответствующей пропорции в нее входили все ткани каждого экземпляра.

Обычно отрезают сегмент толщиной 0,5-1 см после того, как объект разрезан на две половины по главной оси. Полученные таким образом сег­менты ткани быстро измельчают ножом в винипластовой или эмалирован­ной кювете на мелкие кусочки и перемешивают.

Крупные сочные плоды (томатов и т. п.) режут по вертикальной оси на 4 части, берут одну часть от каждого плода, измельчают в винипластовой плоской чашке ножом или грубо растирают в большой фарфоровой ступке и перемешивают. Среднюю пробу мелких плодов и ягод (сливы, смороди­ны) измельчают в ступке целиком. Из плодов косточковых предварительно вынимают косточки. Среднюю пробу листовых овощей (укропа, сельдерея, петрушки, пера лука и пр.) измельчают целиком или же берут 1/2 листовой пластинки ( по оси) каждого листа, входящего в среднюю пробу (шпината, салата, листовой капусты, щавеля и пр.).

Из измельченного и хорошо перемешанного материала берут в химиче­ские стаканчики на 50 см³ или на часовые стекла две параллельные навески на технохимических весах для определения аскорбиновой кислоты. При одновременном анализе нескольких образцов следует стремиться все на­вески для определения аскорбиновой кислоты сразу залить раствором со­ляной кислоты и потом уже растирать в ступке до образования гомогенной массы.

При анализе навеску исследуемого материала в 5-20 г или больше (в зависимости от содержания аскорбиновой кислоты) заливают в ступке 20 см³ 1%-ной соляной кислоты и растирают до образования гомогенной мас­сы. Процесс растирания не должен длиться больше 10 минут. При анализе грубых тканей их растирают в присутствии 2-3 г (в зависимости от навес­ки) хорошо промытого стеклянного песка, который берут по объему. По­лученную массу сливают из ступки (через стеклянную палочку и воронку) в мерную колбу на 100 см³. Ступку споласкивают несколько раз 10%-ной щавелевой кислотой, которую выливают в ту же мерную колбу. Содержи­мое колбы доводят до метки 1%-ной щавелевой кислотой и закрывают ее пробкой, сильно встряхивают и оставляют стоять около 5 минут. Затем со­держимое колбы выливают на сухой фильтр и отфильтровывают часть экс­тракта (около 50 см³) в сухой стакан или колбу.

Соляная кислота извлекает из растительной ткани как свободную, так и связанную аскорбиновую кислоту. Щавелевая же кислота улучшает стой­кость аскорбиновой кислоты в экстрактах.

Для титрования вытяжек из полученного фильтрата пипеткой берут две параллельные порции по 10-20 см³, наливают в стаканчик объемом 50 см³ и титруют из микробюретки 0,001 и. раствором краски (2,6-дихлорфенолин­дофенола) до появления явно-розового окрашивания, не исчезающего в те­чение 0,5-1 минуты.

Вытяжки из богатых аскорбиновой кислотой объектов можно с успе­хом титровать из бюретки с делениями на 0,05 см³, и объемы вытяжек, употребляемых для титрования, могут быть увеличены до 20 см³.

Ввиду стойкости аскорбиновой кислоты в присутствии щавелевой ки­слоты титрование готовых вытяжек при необходимости можно отложить до следующего дня. При вычислении результатов вводят поправку и на ре­активы.

При необходимости произвести особо точные анализы следует принять в расчет и другие вещества, которые могут реагировать с 2,6- дихлорфенолиндофенолом.

Определение аскорбиновой кислоты в окрашенных вытяжках

Многие плоды и ягоды и некоторые овощи дают окрашенные экстрак­ты, что затрудняет определение аскорбиновой кислоты вышеописанным способом. Аскорбиновую кислоту окрашенных вытяжек титруют раство­ром 2,6-дихлорфенолиндофенола (краски) в присутствии хлороформа, ди­хлорэтана или толуола.

Навеску (10 г) экстрагируют как обычно и доводят объем экстракта до 100-200 см³ раствором щавелевой кислоты. После фильтрования берут пи­петкой 5 см³ окрашенного экстракта в пробирки (диаметр 20-25 мм, длина 150 мм) и туда же прибавляют мерным цилиндром по 5 см³ химически чистого хлороформа. Затем вытяжку титруют раствором краски при осто­рожном перемешивании, наклоняя пробирку, прикрытую пробкой.

При появлении первого розового окрашивания в слое хлороформа тит­рование считается законченным. Одновременно проводят такое же титро­вание контрольных проб с той разницей, что вместо экстракта в пробирки прибавляют смесь растворов соляной и щавелевой кислот в соотношении объемов 1:5.

Количество аскорбиновой кислоты (X) в образце вычисляют по форму­ле:

где: а - число куб. см краски (с вычетом поправки на титрование чистого растворителя), которая пошла на титрование экстракта;

Т - титр краски по аскорбиновой кислоте; об - общий объем вытяжки;

об г число куб. см экстракта, взятого для титрования; н - навеска материала.

Литература

1. Ермаков А.И., Арасимович В.В., Смирнова-Иконникова М.И., Ярош Н.П., Луковникова Г.А. Методы биохимического исследования растений. Л.: Колос, 1972. С. 88-92.