4.1.2. Воспроизводимость значений Rf
Существует комплекс факторов, влияющих на воспроизводимость значений Rf. Однако влияние негативных явлений можно существенно уменьшить. Здесь следует отметить следующее.
Качество адсорбента.
Выбор сорбента определяется видом разделяемых химических соединений. Хорошая воспроизводимость может быть получена только в случае полной стандартизации адсорбентов для тонкослойной хроматографии и, предпочтительно, для одних и тех же связующих материалов.Активность адсорбента. Значения Rf компонентов, проявляемых конкретным растворителем, могут меняться в широких пределах. Пластинки, активированные нагреванием при 110°С в течение трех минут в атмосфере с относительной влажностью 50 %, поглощают около половины общего количества влаги, адсорбированной при равновесии. Поэтому рекомендуется для установления равновесия выдерживать пластинку в тече-
17 Москвитин Н.Н. и др. Исследования алкогольных напитков // Газожидкостная хроматография в криминалистических исследованиях: Пособие для экспертов. М.: ВНИИ МВД СССР, 1971.
ние 15 часов в закрытой емкости, содержащей насыщенный раствор бромида натрия, что соответствует стандартным условиям при 2 0°С.
Чистота подвижной фазы. Для измерения точных значений Rf следует использовать растворители высокой чистоты. Присутствие небольших количеств загрязнений (примесей) может оказать существенное влияние на результаты. При применении в качестве подвижной фазы смешанных растворителей для каждого хро-матографического определения следует использовать только свежую смесь, учитывая изменения в составе, вызываемые явлениями испарения или адсорбции, а также различиями в химическом взаимодействии между компонентами раствора.
Влияние температуры. Увеличение температуры окружающего воздуха на 10 °С может обусловить возрастание значения Rf, что связано с усилением испарения растворителя. Если подвижная фаза состоит из смеси растворителей, то различная их испаряемость может привести к изменению состава.
Глубина слоя подвижной фазы.
На значение Rf пятна влияет расстояние между точками нанесения образца и уровнем подвижной фазы в хроматографической камере для проявления. Это особенно важно учитывать в тех случаях, когда подвижная фаза состоит из смеси растворителей различной полярности и ее элюирующая способность зависит от расстояния, пройденного жидкой фазой. В качестве стандарта принимается глубина слоя подвижной фазы на дне емкости 5 мм, а образцы наносятся на 15 мм выше нижнего уровня хроматографи-ческой пластинки.Природа фронта растворителя. Растворитель должен обеспечивать обратимую сорбцию компонентов; он должен сорбироваться хуже определяемых соединений и не мешать обнаружению разделяемых веществ. При продвижении подвижной фазы через слой сорбента отношение количества подвижной фазы к стационарной не является постоянным, оно меньше вблизи фронта растворителя, чем на некотором расстоянии позади него. Значения Rf при применении смешанного растворителя часто наблюдается градиент концентрации растворителя вдоль пластинки. Поэтому стандартное расстояние при проявлении принимается равным определенной величине: 100 или 20 0 мм.
Скорость подвижной фазы. В связи с тем, что скорость установления равновесия не является бесконечной, значение Rf для данного вещества в рассматриваемой системе фаз зависит от скорости подвижной фазы, то есть от используемого метода проявления.
Размер образца. Значение Rf не зависит от размера исследуемого образца, если только линейная емкость адсорбента (максимально допустимая масса образца, приходящаяся на 1 г сорбента) не превышена.
Сложность образца. Значения Rf разделяемых веществ зависят от наличия других растворенных веществ. Для сравнения следует приводить значения Rf чистых соединений, хроматографированных в отдельности.
10. Точность измерения. В случае асимметричных пятен возникают трудности с определением действи- тельного положения центра пятна; к счастью, пятна почти всех соединений имеют симметричную форму. Рас- стояние, пройденное пятном (по центру) и фронтом подвижной фазы, измеряется в миллиметрах, и ошибка каждого измерения составляет не более +1 мм.