Выявление сомаклоналъных вариантов
Сомаклональная изменчивость проявляется на разных уровнях: геномном, хромосомном, генном и молекулярном. О геномных и хромосомных мутациях, возникающих при культивировании клеток и тканей, говорилось выше.
При этом следует отметить, что цитологические методы, детектирующие изменения уровня плоидности, количества хромосом, хромосомные аберрации, не способны выявлять изменения на молекулярном уровне.Наиболее простым методом выявления сомаклоналъных вариантов является оценка фенотипических изменений у растений, регенерировавших из культур клеток или тканей. Однако при наличии нормального фенотипа у растений могут быть скрытые генетические изменения. Мутации, индуцированные условиями культивирования in vitro, могут быть рецессивными, и будут выявляться только в половом потомстве регенерантов. Еще в первых работах по изучению сомаклональной изменчивости, показано, что ее причиной могут быть и точечные генные мутации, возникающие в культуре протопластов или культуре тканей. Изучая сомаклональную изменчивость в культуре тканей томата, Evans и Sharp (1983) выделили 13 разных мутантов среди 230 регенерантов. Методами генанализа показано, что сомаклональная изменчивость обусловлена моногенными рецессивными и доминантными мутациями. Генанализ устойчивых к гербицидам сомаклонов, полученных из клеточных культур табака, показал, что их устойчивость обусловлена доминантными мутациями (Chaleff, Ray, 1984). Shahin и Spivey (1987) показали, что устойчивость к фузариозному увяданию у сомаклонов томата, полученных из культуры протопластов, находится под моногенным контролем.
Выявление сомаклональных вариантов с использованием биохимических методов, например, изоферментного анализа, ограничено количеством доступных биохимических маркеров. Молекулярно-генетические методы достаточно эффективно выявляют изменения в кодирующих и в некодирующих областях генома (Landsmann5 LIhrig5 1985; Harding5 1991, Кузнецова и др.5 2005), примеры использования этих методов были рассмотрены выше. Анализ литературы показывает, что при работе с обширным материалом (например, с большими коллекциями генных банков растений) молекулярные маркеры являются эффективными для экспресс-анализа подлинности, однородности и генетической стабильности образцов.
Необходимо отметить, что сомаклональная изменчивость имеет важное значение как источник новых полезных мутаций для селекции растений (Larkin, Scowcroft, 1981; Evans, 1986; Ahloowalia, 1998). Известны многочисленные примеры использования сомаклональной изменчивости в селекции древесных растений (Ahuja5 1998), сельскохозяйственных культур (Evans, 1986; Rush, 1998), декоративных растений (Brar, Jain5 1998).
6.1.4.