Определение содержания свободного пролина

Для определения содержания свободного пролина использовали методику Бэйтса (Bates et al., 1973). Метод основан на взаимодействии свободного пролина с нингидриновым реактивом, образующим розово-красную окраску.

Навеску листовой ткани ежевики (150-300 мг) гомогенизировали в 10 мл 3%- ного раствора сульфосалициловой кислоты. Гомогенат центрифугировали при 5000 g в течение 10 мин. К 2 мл супернатанта в реакционной пробирке добавляли 2 мл нингидринового реактива и 2 мл ледяной уксусной кислоты. Пробирки закрывали пробкой с обратным холодильником и выдерживали 1 ч на кипящей водяной бане. Затем пробы охлаждали до комнатной температуры, прибавляли к ним по 4 мл толуола и тщательно перемешивали встряхиванием. Верхний слой толуола, содержащий окрашенный комплекс пролин-нингидрин, отделяли от водной фазы, и колориметрировали на ФЭК-56-М при 490 нм в 3-миллиметровых кюветах.

Содержание свободного пролина определяли по калибровочной кривой, построенной с использованием растворов пролина в диапазоне концентраций от 50 до 150 мкг/мл, и выражали в микрограммах на 1 г сырой массы.

2.2.3.3.