Авторизация
Авторизируйтесь
X
  • Логин*
  • Пароль *
или зарегистрируйтесь
Регистрация
X
  • Логин
    (3-15 символов)*
  • Пароль
    (6-15 символов)
    *
  • Подтвердите пароль *
Сообщение администратору
X
 

Структурно-функциональные особенности эндотелия человека в норме и при атеросклерозе

Романов Юрий Аскольдович

Структурно-функциональные особенности эндотелия человека в норме и при атеросклерозе

Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук. Москва - 2003

Диссертация | 2003 | Россия | docx/pdf | 9.09 Мб

Для доступа к источнику авторизируйтесь или зарегистрируйтесь.

Внимание! Все источники запакованы в zip архивы! Для распаковки на android-устройствах Вы можете воспользоваться одним из сторонних приложений, например Total Commander



03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология
Согласно современным представлениям, атеросклероз является многопричинным заболеванием, затрагивающим многие физиологические и патологические механизмы. Среди факторов, на сегодняшний день установленных, ~ генетическая предрасположенность, условия гемодинамики в отдельных участках сосудистого русла, комбинации различных риск-факторов (гиперхолестеринемия, артериальная гипертензия, сахарный диабет), иммунные и аутоиммунные нарушения, вирусная инфекция и т.д. [Wick et al, 2001; Najemnick et al, 1999; Landmesser et al, 2000; Benitez, 1999; La Rossa, 1998; Gimbrone, 1999; Libbi, Hansson, 1991]. Обычно, бывает трудно ответить на вопрос, что же явилось основной причиной развития заболевания.
Многочисленные попытки объяснения патогенеза атеросклероза у человека вылились в создание целого ряда теорий возникновения этого заболевания. Еще в начале 1850-х годов Rokitansky предположил, что отложение фибрина в участках поврежденной сосудистой стенки может вызывать образование атеросклеротичес-кого поражения. Немногим позднее, Virchow указал, что накопление липидов в сосудистой интиме способствует пролиферации клеток и развитию атеросклероза. В дальнейшем, Аничков разработал холестериновую модель атеросклероза у кроликов и определил атеросклероз, как хроническое заболевание, характеризующееся первичным отложением липидов в стенке артерий, вторичным реактивным разрастанием соединительной ткани, и как следствие - образованием склеротических утолщений-бляшек [Anitchkov, 1913]. В последующие годы был предложен целый ряд концепций, из которых наибольшее распространение получила теория Ross [1976, 1986], предполагающая, что атеросклероз является результатом повторного повреждения эндотелия, сопровождающимся адгезией тромбоцитов, их активацией на обнаженной субэндотелиальной поверхности и миграцией макрофагов в интиму. В результате - образование пенистых клеток макрофагального происхождения, миграция и пролиферация гладкомышечных клеток (ГМК), синтез и депонирование внеклеточного матрикса, фиброзирование ткани. Тем не менее, присутствие в эндотелиальной выстилке обширных участков деэндотелиализации было опровергнуто результатами многих исследований [Schwenke, Carew, 1989; Witztum, 1990; Sitnionescu, Sitnionescu, 1993].
В этой связи, под "повреждением" эндотелия в настоящее время принято понимать не механическую денудацию, а сложный комплекс изменений внутриклеточного метаболизма, приводящих к "дисфункции" эндотелиальных
клеток [Ross, 1992; Gimbrone et al, 2000; Toborek, Kaiser, 1999; Shimokawa, 1999]. Сюда можно отнести изменение барьерной функции [Lum, Malik, 1994], нарушения регуляции сосудистого тонуса [Vanhoutte, Mombuli, 1996], фибринолитической активности [Mann, 1997], иммунологических и про-воспалительных параметров клеток и т.д. [Libbi, 1991; Hill, 1997; Gown et al, 1986]. Последствиями дисфункции эндотелиальных клеток (ЭК) могут являться нарушенная реактивность сосудов и вазоспазм, адгезия, трансмиграция и накопление в интиме клеток гематогенного происхождения, нарушение пролиферативной/секреторной функции сосудистых ГМК, а также нарушение процессов регенерации самих ЭК.
Актуальность исследования. Морфологическая гетерогенность ЭК магистральных сосудов по размеру клеток, содержанию белка и плоидности является одной из наиболее ярких отличительных черт эндотелия человека от эндотелия экспериментальных животных. Еще в 1950-е годы было отмечено, что единичные многоядерные ЭК появляются уже в детском возрасте, и в дальнейшем их содержание неуклонно возрастает, достигая десятков процентов в сосудах взрослых людей [Каменская, 1952]. Наибольшее развитие изучение морфологической гетерогенности эндотелия получило в конце 1970-х - начале 80-х годов, когда об этом явлении впервые заговорили, как о процессе, возможно связанном с атерогенезом. Увеличение относительного содержания гигантских многоядерных или, так называемых, "вариантных" ("variant") ЭК в пораженных атеросклерозом сосудах и возрастные корреляции подвели к предположению о том, что эти клетки, возможно, и являются искомым морфологическим базисом атеросклероза [Вихерт, Розинова, 1981, 1983; Repin et al, 1984; Antonov et al, 1986; Tokunaga et al, 1989; Watanabe, 1990; Wu et al, 1999]. Тем не менее, несмотря на длительно повышенный интерес к этой популяции, до настоящего времени никому из исследователей так и не удалось выявить каких-либо существенных метаболических изменений, свойственных данной клеточной разновидности, впрочем, как и полностью отрицать их вовлечение в атерогенез [Wu et al, 1999; Satoh et al, 1998; Tokunaga et al, 1998].
Еще одной, крайне интересной формой морфологической гетерогенности эндотелия магистральных артериальных сосудов человека, является способность ЭК формировать группы - т.н. кластеры, состоящие из клеток приблизительно одного размера и формы. Завидное постоянство, с которым кластеризованный эндотелий выявляется в зонах, предрасположенных к развитию атеросклероза, и участках, окружающих уже существующие атеросклеротические бляшки, свидетельствует, что
эта форма гетерогенности может иметь непосредственное отношение к процессам атерогенеза [Романов, 1989; Романов, Антонов, 1991; Romanov etal, 1995,1999].
В последние годы все больше внимания уделяется возможной взаимосвязи патогенеза атеросклероза и воспаления в сосудистой стенке [Plutzky, 2001; Koenig, 2001; Ross, 1999; Robbie, Libby, 2001]. Это связано с тем, что в механизмах развития различных форм сосудистой патологии, таких как васкулиты, отторжение трансплантата, ишемия-реперфузия и т.п., есть много общего. Адгезия циркулирующих в крови клеточных элементов на эндотелий и их трансмиграция в субэндотелиальные слои интимы является неотъемлемым компонентом многих острых и хронических воспалительных реакций и одним из наиболее ранних событий атерогенеза [Ross, 1999; Faggiotto et al, 1984; Munro, Cotran, 1988].
Основная физиологическая роль миграции клеточных компонентов крови в сосудистую стенку и подлежащие ткани заключается в участии лейкоцитов в различных механизмах защиты организма. Нейтрофилы одними из первых появляются в очаге поражения для нейтрализации патогенного стимула. В дальнейшем, к ним присоединяются лимфоциты, определяющие локальный иммунный ответ и модуляцию иммунитета в целом. Совместные действия различных клеточных популяций заканчиваются, обычно, устранением патогена и репарацией повреждения. При этом, наряду с положительными эффектами присутствия клеток крови, их биологическая активность может иметь и отрицательные стороны, вследствие нарушения баланса метаболических процессов в сосудистой стенке. Одной из причин Инегативного" поведения клеток крови в интиме является их высокая синтетическая и секреторная активность [Cassatella, 1995]. Уже в процессе взаимодействия с эндотелием клетки крови частично активируются [Zimmerman et al, 1992; Lorant et al, 1991]; их дальнейшая судьба определяется микроокружением, т.е. как минимум, двумя факторами: межклеточным матриксом и комплексом биологически активных молекул, продуцируемых а) ими же самими, б) эндотелием, в) ГМК.
Вся последовательность дальнейших событий в интиме возможна лишь при одном условии: существовании участков функционально измененного, активированного эндотелия, экспрессирующего молекулы, участвующие в привлечении гематогенных клеток. Подобные условия, по-видимому, имеют место на начальных стадиях атерогенеза. Исследования экспрессии различных классов молекул клеточной адгезии (МКА) эндотелием показали присутствие в эндотелиальной выстилке участков, экспрессирующих эти белки, в случаях, как экспериментального атеросклероза у животных, так и в сосудах человека [Cybulsky, 
Gimbrone, 1991; Poston et al, 1992; O’Brien et al, 1993; Wood et al, 1993]. Одновременно, в субэндотелии были выявлены скопления клеток гематогенного происхождения (макрофагов, лимфоцитов и т.д.). В этой связи однозначно ответить на вопрос о первичности подобных изменений в эндотелии было затруднительно. С одной стороны, клетки гематогенного происхождения, составляющие интимальные инфильтраты, способны индуцировать экспрессию МКА вышерасположенным эндотелием, благодаря продукции про-воспалительных цитокинов и ростовых факторов. С другой, они вряд ли оказались бы в субэндотелиальном пространстве, не пройдя сквозь тот же эндотелий. Так что повышенная экспрессия МКА в локальных участках сосудистого русла является, по-види.мому, первичной.
Среди многочисленных факторов, способных прямо или опосредовано влиять на экспрессию эндотелием различных классов МКА и принимать участие в инициации воспалительных изменений в сосудистой стенке, особый интерес представляют агенты вирусной природы, особенно, представители семейства герпесвирусов. В первую очередь, это относится к двум наиболее распространенным в человеческой популяции вирусам: вирусу простого герпеса 1 типа (ВПГ-1) и цитомегаловирусу (ЦМВ) [Hajjar, 1991; Persoons et al, 1994; Melnick et al, 1993; Childs et al, 1993]. И тот и другой способны инфицировать клетки сосудистой системы (ЭК и ГМК), вызывая в них комплекс структурных и функциональных изменений. Другой особенностью обоих вирусов является способность формирования латентной инфекции с периодами реактивации, с чем связывают развитие различных осложнений, включая сосудистые, у пациентов, находящихся на иммуносупрессивной терапии. Один из механизмов, лежащих в основе развития воспалительной реакции с участием ВПГ-1-инфицированных ЭК, заключается в способности этого вируса индуцировать экспрессию Р-селектина [Hajjar, 1991], участвующего в инициации взаимодействия ЭК-лейкоцит.
Бесспорным лидером среди агентов вирусной природы, с которыми связывают и развитие атеросклероза, и возникновение трансплантационных осложнений, в основе которых лежат те же клеточные механизмы, является ЦМВ [Persoons et al, 1994; Melnick et al, 1993; Childs et al, 1993]. Как и в случае ВПГ-1, первичная ЦМВ-инфекция клеток сосудистой стенки или реактивация латентного вируса являются триггером в развитии цепи последующих патологических событий. Наибольшее число ЭК и интимальных ГМК, несущих вирусный геном или имеющих признаки реактивации вируса, выявляются в участках наиболее ранних проявлений атеросклеротического процесса [Pampou et al, 2000]. 
Взаимодействие эндотелия с клетками крови представляет собой лишь часть событий, имеющих место в ходе атерогенеза. Не менее интересным представляется взаимодействие ЭК с основным клеточным компонентом неизмененной интимы - ГМК. Известно, что ЭК способны продуцировать как ингибиторы, так и стимуляторы пролиферативной и синтетической активности ГМК. Последние, в свою очередь, также являются мощным, если не основным, источником цитокинов в сосудистой стенке и способны регулировать метаболизм, как самих себя (аутокринно), так и, по-видимому, выше лежащего эндотелия. Таким образом, в сосудистой стенке существует сложная сеть взаимного ингибирования и активации, участниками которых являются все три разновидности клеток, ее составляющих: эндотелиальные клетки, гладкомышечные клетки и клетки крови.
Еще одним фактором, постоянно действующим на все живые одноклеточные и многоклеточные организмы, является фактор гравитации. Об этом факторе обычно забывают, поскольку он постоянно действует в наземных условиях. Между тем, исследования, проводимые в условиях измененной гравитации в модельных системах и условиях реального космического полета, свидетельствуют, что действие этого фактора (точнее, его практически полное отсутствие) сказывается на функционировании большинства исследованных клеточных типов [Таирбеков, 1997]. Данные о регуляторной функции фактора гравитации и возможным последствиям его изменения для организма человека на клеточной уровне в литературе отсутствуют. Неизвестно даже, существует ли гравитационная чувствительность клеточных элементов сосудистой стенки и не с этим ли связан сложный комплекс негативного влияния невесомости на организм человека.
Цель и задачи исследования. Основная цель данного исследования заключалась в поиске взаимосвязи между особенностями морфологической гетерогенности эндотелия и топографией преимущественного возникновения атеросклеротических поражений в сосудах человека и изучении роли межклеточных взаимодействий с участием основных клеточных компонентов сосудистой стенки в развитии сосудистой патологии. К задачам исследования были отнесены:
1. изучение особенностей организации эндотелия аорты человека в зонах с различной предрасположенностью к атеросклерозу (ІІПА - низкой и ВПА - высокой);
2. адаптация методов выделения и культивирования различных типов клеток сосудистой стенки человека;
3. анализ структурно-функциональных параметров ЭК в культурах, полученных раздельно из зон НПА и ВПА;
4. отработка экспериментальных моделей и исследование особенностей межклеточных взаимодействий с участием различных популяций ЭК в условиях со-культивирования с резидентными и мигрирующими в интиму типами клеток (ГМК и клетками крови);
5. изучение возможных механизмов возникновения некоторых форм гетерогенности эндотелия;
6. поиск функциональных изменений различных популяций ЭК, способных объяснить локальный характер развития атеросклеротических поражений в сосудах человека;
7. исследование роли вирусной инфекции в возникновении популяций функционально измененного эндотелия и особенностей взаимодействия инфицированных ЭК с другими клеточными типами;
8. разработка экспериментальной модели гипогравитации с применением культивируемых ЭК человека и изучение особенностей функционирования эндотелия в измененных условиях.
Иными словами, основным направлением работы был поиск ответа на вопрос: почему атеросклеротические поражения развиваются локально и лишь в определенных участках сосудистой стенки, и какие факторы внешней среды могли бы оказаться решающими в развитии различных форм сосудистой патологии, включая атеросклероз?
Научная новизна. Практически все основные результаты работы получены впервые. Для исследования особенностей организации эндотелиального монослоя в сосудах человека была разработана оригинальная методика импрегнации, основанная на фотографическом усилении контраста межклеточных границ. Использование данного метода позволило отказаться от сканирующей электронной микроскопии, избежать ряда артефактов и использовать для анализа световую микроскопию. Кроме этого, стало возможным анализировать поверхность целого сосуда, практически, невзирая на его толщину и неровность рельефа. Использование данной методики на большой выборке аутопсийных аорт (возраст от 1 месяца до 70 лет) позволило проследить динамику нарастания гетерогенности эндотелия в различных участках сосуда, в том числе, в зонах с различной предрасположенностью к атеросклерозу (НПА и ВПА).
Впервые установлено, что особенностью эндотелия в зонах ВПА являются опережающие темпы нарастания морфологической гетерогенности, содержания гигантских ЭК (в среднем вдвое по сравнению с зонами НПА тех же сосудов) и изменение организации монослоя, проявляющееся в кластеризации клеток близкого
размера и формы. Впервые удалось связать морфологические особенности эндотелия с топографией преимущественного развития атеросклеротических поражений.
Благодаря оптимизации методик выделения и культивирования ЭК, был разработан способ получения высоко репрезентативных культур эндотелия из зон с различной предрасположенностью к атеросклерозу и участков с различной степенью атеросклеротического поражения.
При культивировании клеток в присутствии 3Н-тимидина впервые было установлено, что многоядерные ЭК неспособны к синтезу ДНК и пролиферации, что характеризует эту популяцию как покоящуюся и, возможно, терминальную стадию развития эндотелия. Анализ пролиферативной активности ЭК в культурах из зон НПА и ВПА позволил впервые установить, что возникновение атеросклеротических поражений коррелирует со значительным снижением пролиферативной активности клеток. Полученные данные явились первым доказательством существования функциональных, связанных с атеросклерозом различий клеток в зонах с различной предрасположенностью к заболеванию. Дальнейший анализ культур позволил выявить более высокую чувствительность ЭК в культурах из зон ВПА к действию повреждающих факторов и более низкую, по сравнению с клетками из зон НПА, активность аденилатциклазиой системы. Впервые показано, что длительная гипертермия вызывает повреждение культивируемых ЭК, способствует возникновению морфологической гетерогенности эндотелия и может рассматриваться, как дополнительный фактор риска развития сосудистой патологии.
При моделировании межклеточных взаимодействий с помощью со-культиви- рования ЭК и ГМК было установлено, что способностью тормозить пролиферацию ГМК обладают лишь клетки, выделенные из зон НПА нормальных аорт. Клетки из зон ВПА тех же аорт практически не влияли, а клетки из атеросклеротических сосудов иногда даже стимулировали пролиферативную активность ГМК. Полученные данные впервые показали, что межклеточные взаимодействия ЭК и ГМК нарушаются в зонах ВПА уже на ранних этапах атерогенеза и могут быть вовлечены в формирование атеросклеротической бляшки.
Впервые показано, что в составе эндотелиальной выстилки аорты человека присутствуют клетки с высоким запасом пролиферативного потенциала ("камбиальные" ЭК, колониеобразующие единицы эндотелия, тканевые клетки- предшественники), способные формировать дискретные клеточные колонии (клоны) при низкой плотности посадки в культуру. Число таких клеток составляет всего от долей до единиц процентов и всегда ниже в культурах из зон ВПА. Наименьшее
число колониеобразующих ЭК было выявлено в культурах из атеросклеротических зон ВПА, где их содержание составляло всего 1-3 на 1000 посаженных клеток.
Впервые была сформулирована гипотеза о клональной природе кластеров ЭК in situ и их возможной функциональной неоднородности. В подтверждение, была разработана культуральная модель, с помощью которой впервые удалось воспроизвести в культуре гетерогенный кластеризованный монослой ЭК, состоящий из морфологически и функционально различающихся клеточных популяций.
В холе экспериментов, проведенных с одним из наиболее распространенных в человеческой популяции ДНК-содержащих вирусов - вирусом простого герпеса 1 типа (ВПГ-1), удалось прояснить некоторые механизмы нарушения межклеточных взаимодействий с участием ВПГ-1-инфицированных клеток. Полученные данные подтвердили предположение, что вирусная инфекция эндотелия может являться инициирующим фактором в развитии воспалительного процесса и появлении субэндотелиальных инфильтратов, состоящих из клеток гематогенного происхождения, т.е. способствовать возникновению и прогрессии атеросклероза.
Отдельный раздел исследования был посвящен изучению функционирования эндотелия человека в условиях гипогравитации в модельной наземной системе. Полученные данные впервые показали высокую чувствительность культивируемых ЭК человека к изменению гравитации, связанную с изменением структуры актинового цитоскелета, пролиферативной активности, клеточной подвижности, экспрессии различных классов МКА и взаимодействия с клеточными элементами периферической крови.
Научно-практическая значимость работы. Полученные экспериментальные данные позволяют расширить сложившиеся представления о клеточных механизмах развития сосудистой патологии и атеросклероза у человека. Разработанные методические приемы позволяют использовать культуры ЭК человека для проведения исследований в различных областях клеточной биологии эндотелия, изучения структурных изменений эндотелия экспериментальных животных при различных воздействиях и формах патологии, исследования различных аспектов межклеточных взаимодействий с использованием культивируемых клеток человека и животных.
Разработанная методика импрегнации межклеточных границ с последующим анализом препаратов с помощью световой микроскопии может быть успешно применена при исследовании эндотелия, выстилающего, как крупные артериальные и венозные сосуды, так и мелкие их ветви, вплоть до капилляров.
Разработанная модель оценки структурно-функциональных параметров ЭК при инфицировании ВПГ-1 может быть использована для изучения широкого спектра вирусных инфекций человека, в том числе, других представителей семейства герпесвирусов, вирусов гепатита и др., оценки эффективности новых и уже существующих противовирусных препаратов, тестирования различных биологически активных веществ и т.д.
Разработанная модель изучения эффектов гипогравитации с использованием культивируемых ЭК может быть рекомендована для изучения эффектов гипо- и микрогравитации на любых типах клеток человека и экспериментальных животных, культивируемых в прикрепленном состоянии. Результаты исследований, полученные на культивируемых ЭК, могут быть приняты во внимание при разработке методов профилактики осложнений со стороны сердечно-сосудистой и других систем у космонавтов, длительное время пребывающих в состоянии невесомости на орбитальных станциях.
Результаты исследования были представлены в виде устных и стендовых сообщений на международных конгрессах и симпозиумах: 62nd European Atherosclerosis Society Congress (Иерусалим, Израиль, 1993 г.); 3rd Saratoga International Conference on Atherosclerosis (Токио, Япония, 1993 г.); 8,h International Symposium on the Biology of Vascular Cells (Гейдельберг, Германия, 1994 г.); European Section Meeting of the International Society for Heart Research (Копенгаген, Дания, 1994 г.); Iя US-Russia Joint Symposium on Vascular Biology and Cellular Differentiation (Даллас, США, 1994 г.); 6,h International Congress on Cell Biology &. 36* American Society of Cell Biology Annual Meeting (Сан Франциско, США, 1996 г.); Inaugural Meeting of the European Society for Clinical Virology, Progress in Clinical Virology III (Колония, Италия, 1997 г.); 4th Annual Scandinavian Atherosclerosis Conference (Хамлебек, Дания, 1997 г.); 11th International Symposium on Atherosclerosis (Париж, Франция, 1997 г.); Iя Congress of the Asian-Pacific Society of Atherosclerosis and Vascular Disease (Таипеи, Тайвань, 1998 г.); 13th International Symposium on Drugs Affecting Lipid Metabolism (Флоренция, Италия, 1998 г.); Vascular Biology *98 (Сан Франциско, США, 1998 г.); XIII International Symposium on Drugs Affecting Lipid Metabolism (Флоренция, Италия, 1998 г.); Annual Meeting of the International Society for Interferon & Cytokines (Париж, Франция, 1999 г.); 20th Annual Gravitational Physiology Meeting (Орландо, США, 1999 г.); 21я and 22nd Annual Gravitational Physiology Meeting (Нагойя, Япония, 2000; Будапешт, Венгрия, 2001); XII Международной конференции по космической биологии и авиакосмической медицине (Москва, 2002 г.)

Содержание

Список использованных сокращений
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Изменения в сосудистой стенке на ранних стадиях
экспериментального атеросклероза
2. Морфологическая гетерогенность эндотелия человека
3. Молекулярные механизмы распознавания, адгезии и
миграции клеток крови
3.1. Молекулы клеточной адгезии ЭК
3.1.1. Семейство селектинов
Е-селектин
Р-селектин
L-селектин
3.1.2. Семейство иммуноглобулинов
ICAM-1 /ІСАМ-2
VCAM-1
РЕСАМ-1
3.2. Другие участники взаимодействия ЭК-лейкоцит
Фактор активации тромбоцитов, PAF
Интерлейкин-8
Трансформирующий ростовой фактор-бета, TGF-P
3.3. Дальнейшая судьба лейкоцитов в интиме
4. Цитокиновая сеть. Источники и мишени цитокинов в
сосудистой стенке
4.1. Фактор некроза опухолсй-альфа, TNF-a
4.2. Интерлейкин-1
4.3. Антагонист рецептора ИЛ-1
4.4. Интерлейкин-4
4.5. Интсрлейкин-6
4.6. Интерлейкин-10
4.7. Интерлейкин-11
4.8. Интерлейкин-13
4.9. Колоние-стимулирующие факторы
з
4.10. Трансформирующий ростовой фактор-бета, TGF-p 47
4.11. Интерфероны 50
5. Роль вирусов в инициации атеросклероза 52
5.1. Особенности развития вирусной инфекции сосудистой стенки 54
5.2. Адсорбция вирусных частиц и инфицирование 55
5.3. Особенности метаболизма инфицированных клеток 55
6. Структурно-функциональные особенности различных типов культивируемых клеток в условиях невесомости и
моделируемой гипогравитации 57
Заключение 59
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 61
1. Изучение организации эндотелия аорты человека in situ 61
1.1. Химические реактивы 61
1.2. Аутопсийный материал 61
1.3. Импрегнация межклеточных контактов 61
1.4. Выбор зоны исследования 63
1.5. Морфометрия и построение гистограмм 63
2. Культура клеток 64
2.1. Культуральные среды, реагенты и пластик 64
2.2. Первичная культура эндотелия аорты человека 64
2.3. Эндотелий пупочной вены человека 66
2.4. Гладкомышечные клетки 67
2.5. Лейкоциты и линейные клетки 67
2.6. Совместное культивирование ЭК и ГМК 68
2.7. Импрегнация границ ЭК в культуре 68
3. Анализ пролиферативной активности клеток 69
3.1. Кривые роста 69
3.2. Оценка синтеза ДНК по включению меченого
предшественника 69
3.3. Авторадиография 70
4. Оценка повреждающего действия химических и физических
факторов 70
5. Вирусная инфекция ЭК в культуре 71
6. Модель гипогравитации 72
7. Иммуногистохимия и поточная цитофлуориметрия 72
8. Статистический анализ 74
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 75
1. Особенности организации эндотелия аорты человека в норме
и при атеросклерозе 75
1.1. Возрастная динамика изменений эндотелия визуально
неизмененных сосудов 75
1.2. Пространственная организация эндотелия в зонах НПА и
ВПА. Кластеризация эндотелия 78
1.3. Частота выявления кластеризованного эндотелия в зонах НПА
и ВПА 80
1.4. Эндотелий атеросклеротической аорты 81
2. Культура ЭК аорты человека 86
2.1. Содержание многоядерных ЭК в культурах эндотелия из зон
НПА и ВПА 86
2.2. Пролиферативная активность ЭК аорты человека в культуре 89
2.3. Особенности пролиферации клеток из зон НПА и ВПА
(исследование с помощью кривых роста) 90
2.4. Особенности пролиферации клеток из зон НПА и ВПА
(исследование с помощью радиоавтографии) 91
2.5. Способность ЭК из зон НПА и ВПА к длительному
субкультивированию 93
2.6. Формирование колоний при низкой плотности посадки.
Камбиальные клетки эндотелия 94
3. Повреждение и репарация эндотелия 97
3.1. Гипертермия, как потенциальный фактор, вызывающий
повреждение эндотелия 97
3.1.1. Изменения ЭК при коротких временах воздействия
гипертермии 97
3.1.2. Повреждение ЭК при длительном воздействии гипертермии 100
3.1.3. Защитное действие цАМФ-повышающих препаратов при
тепловом повреждении ЭК 101
3.2. Повреждение эндотелия окисленными производными
холестерина 102
3.2.1. Устойчивость ЭК в культурах из зон НПА и ВПА к
повреждающему действию триола
3.3. Способность ЭК из зон НПА и ВПА отвечать подъемом
цАМФ на добавление цАМФ-повышаюших препаратов 106
4. Поиск функциональных различий эндотелия в зонах с
различной предрасположенностью и степенью атеросклеротического поражения 107
4.1. Взаимодействие ЭК - ГМК в условиях совместного
культивирования 108
4.2. Функциональная гетерогенность популяций эндотелия 109
5. Экспрессия МКА и взаимодействие ЭК-лейкоцит в культуре 112
6. Модель кластеризованного эндотелия. Функциональная
гетерогенность кластеров ЭК in vitro 117
6.1. Экспериментальная модель 117
6.2. Структурно-функциональные особенности кластеров ЭК 119
6.2.1. Содержание телец Вейбеля-Паладе и фактора фон
Виллебранда 119
6.2.2. Активность в отношении интимальных ГМК 120
6.2.3. Гетерогенность экспрессии МКА 121
6.2.4. Синтез и депонирование внеклеточного матрикса 124
7. Вирусная инфекция эндотелия 130
7.1. Структурно-функциональные признаки вирусной инфекции
культивируемых ЭК человека 130
7.2. Экспрессия молекул клеточной адгезии ВПГ-1-
инфицированными ЭК 132
7.3. Адгезия клеток периферической крови на инфицированный
эндотелий 133
7.4. Влияние ГМК на развитие вирусной инфекции эндотелия 134
7.5. Продукция цитокинов ВПГ-1-инфицированными ЭК 137
7.6. Продукция цитокинов лейкоцитами крови, активированными
в процессе контакта с ВПГ-1-инфицированным эндотелием 138
7.7. Влияние кондиционированных сред, полученных от
лейкоцитов, активированных в результате контакта с инфицированным/фиксированным эндотелием на репродукцию вируса в ЭК 139
7.8. Влияние кондиционированных сред от активированных
лейкоцитов на экспрессию МКА интактным эндотелием 140 
7.9. Особенности развития вирусной инфекции в модели
кластеризованного эндотелия 142
8. Структурно-функциональные особенности эндотелия
человека в условиях моделируемой гипогравитации 145
8.1. Особенности пролиферации и формирования монослоя ЭК в
условиях моделируемой гипогравитации 146
8.2. Влияние моделируемой гипогравитации на цитоскелет и
миграционную способность клеток 148
8.3. Экспрессия молекул клеточной адгезии и взаимодействие ЭК-
лейкоцит в условиях гипогравитации 151
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 155
ВЫВОДЫ 160
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 162

Диссертация | 2003 | Россия | docx/pdf | 9.09 Мб

Для доступа к источнику авторизируйтесь или зарегистрируйтесь.

Внимание! Все источники запакованы в zip архивы! Для распаковки на android-устройствах Вы можете воспользоваться одним из сторонних приложений, например Total Commander



Структурно-функциональные особенности эндотелия человека в норме и при атеросклерозе

релевантные научные источники:
  • Ответы на экзаменационные вопросы Анатомия, физиология и патология человека
    | Ответы к зачету/экзамену | 2016 | docx | 0.12 Мб
    Вопрос 1 Предмет изучения анатомии, физиологии и патологии человека. Связь их с педагогикой, психологией, невропатологией и другими дисциплинами. Роль знаний по анатомии, физиологии и патологии
  • Основы генетики
    Сазанов А.А. | Основы генетики: учеб, пособие / А.А. Сазанов. - СПб.: ЛГУ им. А.С. Пушкина, 2012. -240 с. | Учебное пособие | 2012 | docx | 3.61 Мб
    В учебном пособии раскрываются основные положения классической и молекулярной генетики в применении к наследственным заболеваниям и генетическим особенностям человека. Существенное внимание уделено
  • Иммунология и аллергология
    | Шпаргалка | 2016 | docx | 0.12 Мб
    1.История формирования представлений об инфекционных заболеваниях и невосприимчивости к ним. Предмет и задачи современной иммунологии. 2.Работы Э.Дженнера по оспопрививанию. Исследования Л.Пастера и
  • Ответы по патологической анатомии
    | Ответы к зачету/экзамену | 2016 | docx | 1.44 Мб
    ОТВЕТЫ Предмет анатомии, физиологии и патологии человека Анатомия человека Связь с другими дисциплинами и значение для преподавателей-дефектологов. 2.Онтогенез.Основные закономерности роста и
  • Ответы к экзамену по патологической анатомии
    | Ответы к зачету/экзамену | 2016 | docx | 6.65 Мб
    Вопросы 1. Дайте определение патологической анатомии, как науки: содержание, цели, задачи, объекты, методы и уровни исследования. Задачи практической патологической анатомии: Методы исследования
  • Ответы на экзамен по предмету Клиника интеллектуальных нарушений
    | Ответы к зачету/экзамену | 2016 | docx | 0.61 Мб
    Контрольные вопросы Понятие «интеллект» по Р. Стернбергу, структура интеллекта. 2. Интегративные уровни корковой деятельности. Основные структурно-функциональные блоки, обеспечивающие интегративную
  • Физиология с основами морфологии
    | Ответы к зачету/экзамену | 2016 | docx | 17.87 Мб
    Физиология – наука о функциях органов и тканей живого организма, процессах, обеспечивающих эти функции, их взаимосвязи, взаимозависимости в условиях адаптации к меняющейся внешней среде. Главные
  • Шпаргалка к госэкзамену по Менеджменту организации
    | Шпаргалка | 2017 | Россия | docx | 0.26 Мб
    1.Рыночный механизм как взаимосвязь элементов рынка: спроса, предложения и цены. Конъюнктура рынка 2.Экономический рост; показатели и факторы экономического роста 3.Эластичность спроса и предложения;
  • Правовые и организационные основы деятельности миграционных служб зарубежных стран
    Никифорова Екатерина Андреевна | Диссертация на соискание ученой степени кандидата юридических наук. Москва - 2004 | Диссертация | 2004 | Зарубежные страны | docx/pdf | 5.99 Мб
    Специальность 12.00.14 —административное право, финансовое право, информационное право. Актуальность темы исследования. Миграция оказывает значительное влияние на глобальную политическую и
  • Ответы к экзамену по патологической физиологии
    | Ответы к зачету/экзамену | 2016 | docx | 0.85 Мб
    ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЕ ВОПРОСЫ 1. Предмет и задачи патологической физиологии. Ее место в системе высшего медицинского образования. Патофизиология как теоретическая основа клинической медицины. 2.

Другие источники по дисциплине Гистология, цитология, клеточная биология: